详解大肠菌群平板计数法的操作要点

大肠菌群

经常用来权衡食品卫生状况的重要指标，绝大部分食品都会请求检测的项目。在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题搅扰着大家，以下来解说一下大肠菌群平板计数法的留意事项。

措施选择

相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢?国标里没有明白规则，但通常以为，产品大肠菌群以100CFU/g(mL)为界，超越这个含量普通以为是含量较高。

但细致什么时分选用平板计数法中止大肠菌群的检测，大部分状况还是要看你的产品执行的规范。假定产品规范请求大肠菌群含量的单位为CFU/g(mL)，那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法细致选用哪版国标此处不再赘述。因而，依据自己产品的状况选择恰当的检测措施。

培育基的请求

平板计数法运用的培育基为结晶紫中性胆盐琼脂培育基，简称VRBA。无论是国标，还是培育基的运用阐明中都明白表示，VRBA是不需求中止灭菌的，煮沸2min即可运用。特别指出这一点是由于很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培育基不信任，惧怕呈现检测异常，那是由于这些小同伴们对其中的原理不分明。

大肠菌群的定义是在一定培育条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因而大肠菌群是不能构成芽孢的，在VRBA培育基煮沸的过程中，即便有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培育基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培育基的容器是需求中止灭菌的，以免容器引入污染。

另外，VRBA是一种选择性的培育基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑止作用而对革兰氏阴性菌简直没有作用，而且平板培育产生的菌落还需求中止复发酵的考证，因而VRBA培育基就不需求中止灭菌了。但值得留意的是，VRBA需求现配现用，配制出的培育基应当在3h之内运用终了。

稀释度的确定

国标中请求选择2-3个适合的连续稀释度。什么样的稀释度是适合的呢？这要依据计数来决议。计数环节请求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板中止计数，因而培育后菌落数在这个范围内的稀释度就是适合的稀释度。

实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员能够估量的，但是对盲样，我们能做的只需依据实践状况多检测几个稀释度了。这里需求提一句，液体样品的检测稀释度能够包含原液。

证明实验

需求从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落中止BGLB肉汤管考证。

这里挑取的菌落也是应当有选择的，典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培育的两种菌落的比例相同或相近，这样能够降低检测过程中的误差。

计数的讲演

讲演过程是很多朋友存在疑问的中央，由于平板计数法的结果讲演需求分离培育基菌落数和复发酵考证两方面中止计算。存在疑问的状况主要有以下几种：

一切稀释度都不在计数范围内怎样办?

这种状况普通都是最低稀释度的平板都小于15CFU，这种状况就是以最低稀释度的平板菌落数乘以考证明验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8，菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气，菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气，则计算过程是这样的：

(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。

连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎样办?

这个需求参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需求先计算每个平皿的考证后的菌落数，再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16，经过复发酵考证产气的管数分别为7、8、8、8，则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为

120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6(我们计14)，

16*8/10=12.8(我们计13)，然后将84、100、14、13四个数代入公式：(84+100+14+13)/(2+0.2)*10=959，结果应讲演960CFU/g(mL)。

只需一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围，其他均不在计数范围怎样办?

这样我们只需求复发酵考证这一个平皿即可，依据这一个平皿的菌落数中止讲演。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13，则我们只需求从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落中止复发酵考证即可，假定共有7支发酵管阳性，则应计算142*7/10=99.4，结果讲演990CFU/g(mL)。

其实只需是平板菌落计数的相关问题，我们都应依照GB 4789.1-2016里请求的结果与讲演请求中止计算和讲演即可，无论那种状况，都是万变不离其宗的。

以上就是关于大肠菌群平板计数法的部分问题解答，若是您在实验室检测过程中还存在别的问题，欢送在后台中止留言，我们将定期为您解答。

来源：环凯(huankai.coom)转载于食品微生物检测公众号。

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